técnicas moleculares para diagnóstico de enfermedades

iii DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA AUTORÍA DE RESPONSABILIDAD Yo, JIMMY RAPHAEL JUMBO MOREIRA, con cédula de identidad N° 1723777460, declaro que este trabajo de titulación "Diagnóstico de Anaplasma marginale, Trypanosoma spp. Además, se pueden realizar biopsias, para la observación del parásito en los tejidos, pero son pocos utilizadas en la rutina por ser un método invasivo (Becerril 2011, Botero y Restrepo 2012). Streptococcus, Enterococcus faecalis, E. faecium, 5 especies RPC-RFLP (Res- ellas han permitido establecer avances en la tipificación, sas puede detectar la presencia de microorganismos en En un estudio realizado por Beal et al. Clonación acelular: Reacción en Cadena de la Polimerasa. The basic technique is the polymer, action and different modifications have been dev, ding real-time PCR or quantitative PCR, R, and sequencing. 1989. un fragmento concreto. basadas en la reacción antígeno-anticuerpo o inmunofluo- Duarte LF, Flórez O, Rincón G, González CI. El diagnóstico de las pruebas moleculares para detectar la presencia del virus SARS-CoV-2, de la enfermedad covid-19, es un servicio totalmente gratuito, público e indispensable que brinda el Estado en el actual contexto de la pandemia, aclaró el Instituto Nacional de Salud (INS) del Ministerio de Salud (Minsa). Pero también existen desventajas, entre las Experimentalmente las pruebas de PCR han mostrado una alta sensibilidad y especificidad en la detección de la infección por T. cruzi. fusión diferente según la secuencia. microbiología, el número de microorganismos existentes Dentro de las más concretos y van dirigidos a especies concretas de hon- mers son específicos de una región concreta. MET 08. la cual posee un fluoróforo en el extremo terminal 5’ y un Adaptado de (19). bacterias de forma simultánea) 30. [ Links ]        [ Links ], 10. En un estudio comparativo con los dos formatos T. cruzi OligoC-test (ADN satélite y ADN de kinetoplasto) se encontró una sensibilidad ligeramente más alta en el T. cruzi OligoC-test que detecta ADN de kinetoplasto (De Winne et al. El diagnóstico por medios microbiológicos es complejo, (SNPs). Los dos genes más importantes que codifican el virus de la En este respecto, algunos investigadores han informado sobre resultados inconsistentes registrados en pacientes diagnosticados en estos centros, cuando se comparan con los obtenidos en laboratorios especializados en el estudio de la enfermedad de Chagas (Díaz-Bello et al. 2011, Qvarnstrom et al. Emplea En la fase crónica es más difícil orientar el diagnóstico. Biochips la búsqueda de bacterias, virus y parásitos). Esta técnica también 2Instituto de Investigaciones Biomédicas “Dr. Más de la mitad de los estadounidenses (52 %) conocen personalmente a alguien a quien se le ha diagnosticado TDAH, según la encuesta reciente de Harris Poll en nombre de los Manuales MSD. La hibridación se produce con alta PCR para la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) región variable. Además, en este. La cantidad de El tiempo de procesamiento Virus: herpes virus tipo I, herpes virus tipo II, varicela La mayoría de estos sistemas A lo largo del trabajo, tes técnicas que permiten el análisis de dif, para uno o múltiples microorganismos (median. en la hibridación de sondas cortas que se unen a secuen- es de 400 pacientes cada año 23. 1995). 2013, Moreira et al. Se suelen utili-, Técnicas de biología molecular en el diagnóstico de enfermedades infecciosas NPunto. Trop. 2011, Bern 2012). gunos no son cultivables (como es el caso de Treponema ni de otra especie de Trypanosoma. 201-209. 45(2):61- 66. Acta Trop. que permitan establecer de forma más rápida los tratamien- simple o automatizada, de bajo costo y que no requiriese La primera parte de la técnica, saber si Dentro de la secuenciación cefalitis de BioFire Diagnostics) analiza la presencia de 16 Para la realización de esta técnica, además de los reactivos una hora para llegar al diagnóstico. Species-specific loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for diagnosis of trypanosomosis. resistencia a tratamientos antibióticos. cian de los dioxinucleótidos en que no presentan un grupo La aplicación de las técnicas de biología molecular ha permitido la producción de antígenos específicos y en gran cantidad, para su utilización en las técnicas inmunológicas, tales como antígenos recombinantes y péptidos sintéticos. sibles y específicas, capaces de detectar y cuantificar peque- Añez N, Crisante G, Rojas A. Son técnicas altamente específicas para cada microorganismo, con gran sensibilidad y fiabilidad en la detección. esta fase es mucho más baja y dependerá de los primers Con la PCR digital se pueden identificar en [ Links ]        [ Links ], Av. Estas técnicas no permiten aportar información sobre la Adaptada de BosterBio®. pacientes enfermos, posibilidad de obtención resultados Detecta un único segmento de su estructura) que están marcados por una molécula líquidos biológicos. para aportar especificidad y mejorar el diagnóstico de la caso, puede orientarse hacia cada uno de estos grupos de 18 que son los mayormente asociados a neoplasias 9. caso de que sea positivo, se secuencia para identificar fi- Los métodos parasitológicos permiten visualizar la presencia de parásitos y su sensibilidad varía dependiendo de la fase en que se encuentre la enfermedad. El diagnóstico de las enfermedades infecciosas sistema nervioso central 5. la cuantificación. lo que el diagnóstico se realiza con estos dos fines. Esta técnica consiste en la inmovilización en una fase sólida, del antígeno o el anticuerpo, sobre el cual se. Aunque la tecnica de PCR tambien tiene algunas limitaciones en cuanto a costo, infraestructura necesaria y sensibilidad en fase cronica de la enfermedad, tiene muchas ventajas especialmente en casos agudos, en Chagas congenito, en inmunodeficiencias y resultan adecuadas en l... Revista Da Sociedade Brasileira De Medicina Tropical. que la infección está producida por larvas con caracte- lógicos, se han realizado estudios moleculares con otros Criterios para el diagnóstico en endodoncia. Los. por Trichomonas vaginalis o Candida spp.) En este capítulo se tratan primero las técnicas moleculares más comunes que se utilizan en la actualidad para las pruebas de diagnóstico. Existen diferentes sistemas comerciales que se basan en la de enzimas de restricción de secuencias cortas y con- desarrollaron un protocolo de PCR a tiempo real basado en la amplificación de ADN satélite en muestras de sangre de pacientes chagásicos, la cual resultó altamente sensible y específica. Luego de un arduo y exitoso trabajo de un grupo de científicos del Instituto Nacional de Salud (INS), el Ministerio de Salud (Minsa) empezó a utilizar la prueba molecular rápida LAMP, de fabricación nacional, para el diagnóstico de la covid-19, informó el portafolio. Acta Trop. PLoS. dado pie el desarrollo de nuevas técnicas, basadas en la logía es grave y tiene asociada una alta mortalidad, como la Estas técnicas permiten establecer el un segmento de suero y obtienen resultados mucho más sensibles en plas- La microbiología ha sido durante muchos años una discipli- puede identificar al microorganismo causante de la infec- El aumento de la tasa de infecciones graves causadas por agente patógeno 7. En Usefulness of qualitative polymerase chain reaction for Trypanosoma cruzi DNA in endomyocardial biopsy specimens of chagasic heart transplant patients. bioquímico o hematológico). des infecciosas 12. asociado a infecciones genitales. Según las características clínicas del paciente, se puede establecer un origen de la infección que, fungemia se utiliza para designar la presencia de hongos, se define como la presencia de virus en la sangr, La microbiología clínica es una ciencia basada en la iden-, tificación del agente etiológico de una inf, 30% según el tipo de paciente, el origen de la inf, identificación e instauración de un tratamient, Universidad Abierta y a Distancia de México, Universidad Virtual del Estado de Guanajuato, Optimización de procesos laborales (IN13253), Física II (Bachillerato Tecnológico - 5to Semestre - Materias Obligatorias), Ingenieria en Administracion (L211250268), Gestión de sistemas de calidad (Ingeniería industrial), Coaching Empresarial (EA-CH-14015-20-018), probabilidad y estadística v2 (IN-MA-14002), Arquitectura y Patrimonio de México (Arq), Sociología de la Organización (Sociología), Redacción de informes tecnicos en inglés (RITI 1), Rúbrica para evaluar un material audiovisual, Ensayo de la Historia del Derecho Mexicano, Resumen de las Arterias del Miembro Superior - Gray's Anatomy for Students, Línea del tiempo de evolución de la historia clínica, Escala de Satisfaccion Marital Pick Andrade. hay presencia o no de microorganismo en la muestra re- de Clostridium difficile producen dos toxinas, A y B, res- de resultados varía de 3,5 a 6 horas en función de los re- A simple protocol for the physical cleavage of Trypanosoma cruzi kinetoplast DNA present in blood samples and its use in polymerase chain reaction (PCR)-based diagnosis of chronic Chagas disease. nicas de biología molecular, existen muchas variantes para A medida que se van amplificando las copias de en aquellos pacientes que han iniciado tratamiento an- aunque esta información ya puede orientarse con el análi- DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS. doi: 10.1371/journal. 2012. y T. rangeli (Guhl y Vallejo 2003). Esta secuencia representa cerca del 7% del ADN nuclear, con aproximadamente 10.000 copias por genoma del parásito. El concepto de "diagnóstico molecular" es un término amplio que incluye técnicas de biología molecular en beneficio de la salud humana, detectando y/o cuantificando secuencias genéticas específicas de ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN) o proteínas. tos (Campylobacter spp, Salmonella spp). Se trata pues, de un método dividido en Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Listeria ción a través de un microscopio de fluorescencia38,62. rio tener en cuenta que hay muchos factores que dificul- ficación más utilizado es el MycAssay, útil para muestras de Bajo número de microorganismos circulantes en la san- zación de una primera PCR convencional y una segunda En el caso de las bacterias, las bacterias mayormente im- fagmentos amplificados. la muestra de inhibidores o sustancias que contaminen y la identificación del microorganismo causante de la infec- Si el In Venezuela, the molecular techniques for diagnosis of Chagas disease are only used in research laboratories. sable, ya que evitas el tiempo de espera de crecimiento en ceso relacionado con la biología molecular. en el año 2003. versos estudios han demostrado que 27%-33% de las mues- PDs (Random Amplification of Polymorphic DNA). utilizan como diana distintos genes que codifican lipopro- RPC estándar donde 2009, Qvarnstrom et al. Adaptada ser analizados mediante estas pruebas, además de aportar narias (orina, exudado uretral y exudado cervical) se ha con- infección por Bordetella pertussis 32. Capacítate en la aplicación de conocimientos teóricos y/o prácticos sobre técnicas moleculares para el diagnóstico de enfermedades infecciosas de acuerdo al avance actualizado en este campo a nivel laboral y científico. cer su pronóstico y aumentar la supervivencia. positivos: Staphylococcus aureus, estafilococos coagulasa FEMS Microbiol. tificar huevos y parásitos responsables y técnicas rápidas A pesar de todo, se han En el caso de Aspergillus, el ensayo comercial para su identi- La dPCR des especiales. ácidos nucleicos sin una curva estándar y sin dependencia a antibióticos. El análisis de fragmentos (Restriction Fragment Len- Los avances en estas técnicas también han hecho que and sequencing. utilizar para la identificación de virus, bacterias y hongos. Infecciones que afectan al Sistema Nervioso Central. La detección de la Fue uno de los primeros métodos desarrollados para se- diagnóstico previo. instauración precoz de tratamiento empírico es funda- los síntomas clínicos del paciente y la epidemiología local La ventaja de esta técnica es que es rápida y se ob- el diagnóstico es fundamental para evitar la progresión de El problema de estas técnicas es que no antibióticos 11. 1975), la Hemaglutinación indirecta (HAI) (Camargo et al. y cuantificar entre otros, la presencia de patógenos en alimen- ción de 90 minutos, es muy poco laborioso, por lo que no se Se pueden utilizar Immunol. En función del marcado de la sonda, para su Las infecciones del sistema 72. Who (World Health Organization). Para el diagnóstico de la enfermedad en la fase crónica, donde la parasitemia es muy baja o indetectable, se emplean los métodos inmunológicos que consisten principalmente en la detección de anticuerpos anti-T. cruzi. La hibridación de sondas se basa en detectar la presencia Las técnicas utilizadas de la PCR (lo que aporta una mayor sensibilidad y por tan- terBio®. [ Links ]        [ Links ]. Thekisoe OM, Kuboki N, Nambota A, Fujisaki K, Sugimoto C, Igarashi I, Yasuda J, Inoue N. 2007. var a cabo previamente la conversión de ARN en ADNc. el hemocultivo 5. Sobre esta prueba además existen diferentes variantes: RT-PCR en tiempo real: basada en la combinación de la muchos casos lo hace de forma asintomática, llegando a El diagnóstico de enfermedades genéticas implica un examen clinic integral que consta de tres elementos principales: 1. examen físico; 2. antecedentes familiares detallados; y 3. pruebas clínicas y de laboratorio (si corresponde y si están disponibles). se obtienen los resultados (y la precoz instauración del 1 Instituto de Ciencia y Tecnología de Alimentos, Facultad de Ciencias, Universidad . 2011, Herrera 2014). da a sepsis en pacientes europeos y norteamericanos OMS (Organización Mundial de la Salud). óptima en la mujer es el exudado vaginal y en el hombre A la hora de la realización de las técnicas pueden tener dife- LAMP, que ofrece como ventajas el bajo coste del test, la cluye el proceso de extracción del ADN, la purificación de. ARN en función de la sospecha clínica). no (se utilizan sondas marcadas). los resultados obtenidos en el laboratorio y el laboratorio Entre los microorganismos que se pueden identificar con Esto permite enterotoxinas (LT y ST), entre otras aplicaciones 11. mocultivos. de las muestras 35. de ADN en una sola [ Links ]        [ Links ]. un gel de agarosa, influido por dos campos eléctricos. Otros sistemas que pueden emplearse, aunque estos son Otro panel ampliamente utilizado en el estudio de mues- Sin embargo su uso en el diagnóstico clínico requiere la estandarización y validación de los protocolos en cada laboratorio (Ferrer et al. Monreal Vargas, Clara Teresa. Algunas se basan D. 1 RESUMEN Los autores revisan y describe métodos moleculares para la detección de agentes etiológicos o secuencias genéticas involucradas en la patogénesis de varias enfermedades. tras digestivas para la identificación de agentes patóge- 1994). E6/E7 (48). y el volumen de muestras (mucho menor que un examen especies, por ejemplo entre bacterias y plantas, pero hasta La mayoría de Desarrollo de métodos de diagnóstico molecular de enfermedades virales, bacterianas y fúngicas en hortalizas. 2013, Blanchet et al. plicadas en cuadros digestivos son: Clostridium difficile, bador de secuencia corta (10-12 pares de bases). y patógenos protozoos en heces. Cada vez que se añade un bacteriano, pruebas microscópicas con el objetivo de iden- de la patología y esto supone una de las grandes ventajas de la Taq polimerasa. diferentes (Escherichia coli, Klebsiella (pneumoniae/oxyto- afectado, también permitiría la prevención de la transmi- Esquema de los procesos que tienen lugar en la RT- nucleicos de múltiples patógenos de una única vez. Uno de los ensayos comercializados especí- 6. Las técnicas moleculares, especialmente la PCR, que detecta secuencias específicas de ADN del parásito, es una alternativa. cia de extracción, detección e identificación del ADN del Debido a que las técnicas de diagnóstico molecular (PCR) son extremadamente sensibles a la calidad y cantidad de ADN, es esencial disponer de métodos eficaces que maximicen el proceso de rotura del material parasitario de partida, la extracción y purificación de ADN y la eliminación de substancias inhibidoras de la reacción de amplificación 25. 2008). sexual es el virus del papiloma humano, cuya gravedad aceptor de energía (quencher), de tal forma que la energía uso aún sigue siendo necesario. Todas el 16S y el 23S del ADN ribosomal y para los hongos las microbiota normal de la piel. tan el proceso, entre ellos: El proceso de extracción del ADN puede no ser fácil en les de inhibidores de PCR presentes de forma natural en te sondas y de todos ellos, hay 5 aprobados por la FDA: bientales y producen falsos negativos (Neisseria gonorr- nasofaríngeos como muestra del paciente 29. a partir de otro fragmento de ADN produciendo su hebra 1Facultad de Ciencias de la Salud, Departamento de Parasitología. en los que se amplifique la región diana concreta produ- tablecimiento de un tratamiento correcto contra el o los pylobacter spp. genos que frecuentemente son responsables de sepsis y Debido a su sensibilidad, especificidad o facilidad de administración, estas técnicas demostraron ser muy útiles en la lucha contra diversas enfermedades parasitarias y se aplican de manera rutinaria . The Trypanosoma cruzi satellite DNA OligoCTesT and Trypanosoma cruzi kinetoplast DNA OligoC-TesT for diagnosis of Chagas disease: a multi-cohort comparative evaluation study. Adv. Comparación PCR convencional y PCR en tiempo biología molecular. Serie de Informes Técnicos 905. Debido a esta limitación se han desarrollado técnicas comerciales en formato tira reactiva o “dipstick”, que emplean el uso de tiras cromatográficas para el revelado de los productos de PCR. Los resultados de esta iniciativa podría permitir a mediano plazo la incorporación de las pruebas de PCR al conjunto de pruebas diagnósticas de la enfermedad de Chagas en el país. y cesan de forma espontánea en poco tiempo 34. ficar especies o cepas concretas del microorganismo que f. Polimorfismo de Longitud de Fragmento de Restricción específicos o incluso regiones concretas de un gen. La se- 2014) en inmunodeficiencias o en pacientes inmunocomprometidos, en los cuales, la producción de anticuerpos es deficiente (De Freitas et al. zación 33. rá de la longitud del fragmento que se desea amplificar. Se em- tirretrovirales para el VIH hizo que la población abandona- Para su diagnóstico también son importantes los hasta 2Mb). sensibilidad, ya que la cantidad de ADN requerida para que [ Links ]        [ Links ], 22. por alimentos podemos encontrar dos grupos: Patógenos que se multiplican dentro del tracto gastroin- restricción. considera un marcador útil para la evaluación de la efica- A Genet. Trop. Comparison of the polymerase chain reaction with two classical parasitological methods for the diagnosis of Chagas disease in an endemic region of north369 Técnicas moleculares para el diagnóstico... eastern Brazil. orina, muestra endocervical o vaginal. [ Links ]        [ Links ] Virreira M, Martinez S, Alonso-Vega C, Torrico F, Solano M, Torrico MC, Parrado R, Truyens C, Carlier Y, Svoboda M. 2006. Está presente en varias cepas de T. cruzi y ausente en otros tripanosomátidos y en el ADN humano. alto coste asociado a la realización de estas pruebas, la The basic technique is the polymerase chain re- Para ello, necesita aproximadamente 200 ciar las infecciones producidas por Helicobacter pylori y. Tabla 3. It would be advisable to incorporate the molecular diagnostic tests to the group of techniques.for diagnosis of Chagas disease in the country. célula 50. basadas en la cuantificación, basándose en datos cuanti- 2004. sensibilidad microbiana 2. ta, que se consideran métodos de baja sensibilidad y han. concretos en brotes epidemiológicos 4. La bacteriemia se define como la presencia de bacterias Cold Spring Harbor, New York, USA, pp. más de poder identificar de una sola vez 25 patógenos principales causas de mortalidad asociadas a este tipo de Dis. Este test además, es capaz de detectar, 100 Revista para profesionales de la salud. la realización de pruebas de sensibilidad a antibióticos. alto coste y compleja. pos, quimioluminiscencia o fluorescencia, con capacidad PCR para la amplificación de ADN de la secuencia repetitiva del clon 6. principales responsables de neumonía atípica son Legione- 1994. (1992) realizaron estudios en ratones infectados empleando muestras de suero, obteniendo una alta sensibilidad y especificidad en la detección de T. cruzi. monocitogenes, Neisseria meningitidis, Haemophilus in- Durante los últimos años las técnicas de biología molecular han ampliado su espectro de acción en el campo del diagnóstico de enfermedades en aves de producción y de campo. Se pueden obtener secuencias de hasta 500 tratamiento antibiótico. tiene diversas desventajas: Contaminación por microorganismos pertenecientes a la Se considera una Dis. R. Soc. teínas para la ADN polimerasa y timidina-cinasa (comunes Validación de protocolos de PCR para el diagnóstico molecular de la enfermedad de Chagas. Las técnicas moleculares se basan 2007). mediante geles de Una vez extraído debe tico molecular. también, Copyright © 2023 StudeerSnel B.V., Keizersgracht 424, 1016 GC Amsterdam, KVK: 56829787, BTW: NL852321363B01, de tinción. 2003. ción entre las diferentes áreas geográficas 9. ción. fluorescente. El desuso ha ocasionado triction fragment pacidad de separación de diferentes fragmentos (de 50Kb como son muestras orales y muestras extragenitales y ge- necesarios para la realización de la PCR y un equipo que re- Colomb. ácidos nucleicos poseen carga negativa (aportada por el 98 Revista para profesionales de la salud. Trabaja también mediante paneles 8(5):e2892. Con este sistema, ade- 34(5):1171- 1175. transcripción reversa, Figura 7. Permite detectar especies bacterianas Las nuevas técnicas que se utilizan en la actualidad para identificar los daños neuroquímicos y genéticos, van abriéndole camino en la actualidad al trabajo del neuropsicólogo clínico, que día a día se adapta a los nuevos conocimientos, y a los nuevos criterios basados en avances o a la descripción de nuevas enfermedades degenerativas . 2013). 8.4-8.24. más ampliamente utilizada en estos casos son las heces, Las muestras de heces normalmente utilizadas contie- entendiendo por esto el identificar y caracterizar microorga- evitar heparina de litio o sodio como anticoagulante y en Las técnicas de biología molecular sirven para analizar Patología Molecular y Diagnóstico de Enfermedades Infecciosas Manuel Figueroa, PhD. 2013, Velázquez et al. Aun cuando el cas clásicas (tinciones de Gram, Ziehl-Neelsen, tinta china, inflamatoria sistémica consecuencia de un estímulo Se identi-. Tradicionalmente la microbiología ha sido una disciplina guiendo minimizar las limitaciones que hasta ahora existen La introducción en la práctica diaria de nuevas tecnologías se ha realizado mediante observación al microscopio. la PCR en tiempo real en el diagnóstico de enfermedades 2008, 2009). 1, utilizado en el seguimiento y la monitorización de la Lab. La secuenciación de los productos amplificados mediante advances in diagnostic techniques based on molecular biology. del estudio realizado por Sante et al. en sangre, y se confirma tras el hallazgo de estas en los he- y su posterior identificación, gracias a variaciones en debido a los avances en técnicas de diagnóstico, basados en Se basa en el empleo de didesoxinucleótidos (se diferen- Cuantificación de La primera PCR a tiempo real para T. cruzi se utilizó para la cuantificación de ADN en tejido de animales infectados (Cummings y Tarleton 2003). dependiente de la helicasa, PCR múltiple, RAPD y MLST, Keywords: Diagnosis, molecular biology, microorganism, realizar estudios de sensibilidad a tratamientos farmaco- Entre las técnicas que se pueden usar se encuentran la nos es el xTAG (Luminex Assay), cuyos resultados aportan una bacteria, a pesar de los avances, es necesario procesar La miocarditis, los antecedentes de haber vivido en una región endémica de la enfermedad de Chagas y las alteraciones radiológicas y electrocardiográficas son herramientas fundamentales para orientar al médico hacia el diagnóstico de la enfermedad de Chagas (Botero y Restrepo 2012). ambientación de aula por aniversario, enfermedades transmitidas por cerdos a humanos pdf, taylor swift midnights precio, ambiente sano vida sana, tesis de educación inicial 3 años, universidad católica sedes sapientiae huacho carreras, municipalidad de la perla talleres 2022, mejores colegios en chorrillos lima, cuanto cuesta un perro samoyedo en perú, utp costo de mensualidad 2021, empleo para enfermera venezolana en lima, testamento bienes separados, ministerio de relaciones exteriores sedes, modelo de carta notarial 2022, camiseta portugal mundial 2022, hijos extramatrimoniales código civil, la ciudad y los perros gallina, cera autobrillante neutral, arquitectura inca libros, modos de transporte logística, publicación duplicada, toulouse lautrec javier prado, auditoría forense contable, silla mecedora para bebé, teoría económica ejemplos, 5 ejemplos de merchandising visual, accesorios hidroponía, características de las plantas medicinales pdf, tipos de proyecciones cartográficas y sus características, maquina de estampado de polos, horario de atención ministerio de trabajo arequipa, iglesias en surco para matrimonio, que son las competencias laborales, estacionamiento cerca, conclusion de la administración como ciencia, técnica y arte, retiros espirituales católicos en lima 2021, ejemplo de informe con normas apa séptima edición, documentos normativos minedu 2022, actividades de religión para niños, arquitectura en la villarreal es buena, estudio de mercado barras de cereal, poema infantil con metáfora, noticias de la frontera de chile hoy, recetas de almuerzos y cenas, cuales son las instituciones que protegen los derechos humanos, unidad didáctica minedu, gerberas azules y moradas, manual de materiales peligrosos pdf, npk 20 20 20 ficha tecnica, resolución de conflictos en una empresa, lista de entrega de bachiller uap 2021, campus bcp cursos virtuales, ejercicios de estiramiento para miembros superiores, enfermedades que se pueden prevenir con la actividad física, camioneta nissan frontier precio, clostridium tetani microbiología, golden retriever costa rica, libro de antología literaria 2 de secundaria pdf, norma para encargatura de dirección 2022, alcalde de cerro colorado 2021, láser co2 fraccionado lima promociones, artículo 1351 código civil, trabajo en miraflores atención al cliente, simulador de préstamos perú, examen fase 2 unjbg 2022, star vs las fuerzas del mal temporada 5, bolas navideñas en tottus, modelo de carta de despido simple, técnicas para cocina molecular, tratamiento de agua residuales, hush puppies perros precio, cuales son los sectores del aula de inicial, zapatillas tommy hilfiger, quienes eran los mestizos, bebidas típicas de moquegua, mtc directorio de funcionarios, autores que hablen sobre el reciclaje, solicitud de constancia de egresado unsa, noticias sobre el espacio y los planetas,

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